应用场景:
从细胞裂解液或转染上清中分离完整病毒颗粒,去除宿主细胞蛋白、DNA及未组装衣壳。
操作流程:
- 前处理:离心或深层过滤去除细胞碎片,获得澄清裂解液。
- 膜包选择:使用低吸附性PES膜(如Sartorius Hydrosart®),MWCO 300 kDa(适用于AAV,直径~25 nm)。
- 切向流浓缩:初始体积2 L浓缩至50 mL,TMP控制在2 bar以下以减少病毒破裂。
- 洗滤纯化:通过5倍体积的PBS缓冲液置换,去除残留杂质。
- 过滤:使用0.22 μm无菌滤器进行终端除菌。
优势:
- 比超速离心法更温和,病毒回收率可达70%~80%。
- 可同时去除<300 kDa的宿主蛋白(如HCPs),纯度显著提高。
注意事项:
- 病毒对剪切敏感,需使用宽流道膜包并限制泵速(如<150 RPM)。
- 避免使用强酸/碱清洗,改用0.1% Tween-20 + 0.1 M NaOH温和处理膜包。