应用场景:
从细胞膜中提取疏水性膜蛋白(如GPCRs),并通过缓冲液置换促进其正确折叠。
操作流程:
- 膜蛋白提取:使用去垢剂(如DDM)裂解细胞膜,离心获得含膜蛋白的上清。
- 去垢剂置换:通过TFF系统,用不含去垢剂的缓冲液逐步置换,促使膜蛋白形成胶束或脂质体包裹结构。
- 复性监测:通过圆二色谱(CD)或荧光光谱检测蛋白构象变化。
优势:
- 温和去除去垢剂,避免透析导致的蛋白沉淀。
- 可控制置换速率,优化复性条件。
注意事项:
- 需选择耐去垢剂的膜材料(如PVDF)。
- 复性过程中需维持低剪切力(泵速<100 RPM)。